發(fā)布時(shí)間:2012-03-19
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超微粉碎決明子對其大黃酚溶出量的影響
李曉明，王躍生，閆寒，章軍，唐曉軍
（中國中醫研究院中藥研究所，北京 100700）
本文由山東三清不銹鋼設備有限公司摘錄 如需幫助請致電：0531-89217677 13969126696
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摘要：對超微粉碎后決明子進(jìn)行大黃酚溶出量的對比研究. 結果表明：在相同提取時(shí)間和條件下水煎煮決明子藥材，大黃酚的提取率只有7.6%，而經(jīng)不同條件超微碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；5min水浸泡下，決明子微粉中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當.粉碎前對樣品進(jìn)行適當干燥可提高總大黃酚的溶出量.
關(guān)鍵詞：超微粉碎；決明子；大黃酚
中圖分類(lèi)號：R284.1 文獻標識碼：B 文章編號：1005-9903（2001）06-0006-03
超微粉碎技術(shù)在中藥領(lǐng)域中的應用是近年來(lái)興起的一項新技術(shù)。經(jīng)超微粉碎后中藥材，粒度細微均勻，細胞壁多被破碎，甚至完全破碎，因而比表面積增加，有利于內容物的溶出，便于有效成分的提取。所以，采用超微粉碎技術(shù)處理中藥材是該技術(shù)在中藥領(lǐng)域中應用的一個(gè)重要方面，因而合理應用該技術(shù)具有較現實(shí)的研究意義。
決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明子C.tora L.的成熟種子，為常用中藥[1]。決明子具有驅風(fēng)散熱、清肝明目、潤腸通便功能，臨床常用于治療目赤腫痛、青盲、雀目、大便秘結等癥。現代研究表明，決明子含蒽醌含量最高，文獻報道約為0.25%[2]，總蒽醌含量約為0.61%[3]；另外還含有維生素A樣物質(zhì)、粘液、蛋白質(zhì)、谷甾醇、氨基酸及脂肪油等成分。近年來(lái)研究證明，決明子還具有降壓作用[4]，此外，決明子還具有降壓作用[5]及明顯改善體內膽固醇的分布，這些均有利于預防動(dòng)脈粥樣硬化[6]等心腦血管疾病。本文擬研究經(jīng)超微粉碎后的決明子，其微粉中對所含蒽醌類(lèi)化合物大黃酚溶出量的影響。
1、儀器與材料
1.1儀器 超微粉碎機：型號：SQW-6型超微粉碎機。
1.2日立7400液相色譜儀。
1.3藥材 決明子由同仁堂飲片廠(chǎng)提供，為C. obtusifolia L.T C.tora L.的成熟種子的混合物；決明子經(jīng)超微粉碎加工并提供粒度的測定在電腦成像粒度分析儀上進(jìn)行，各微粉樣品的粉碎條件如下：
1.4試劑 大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:796-9302)。甲醇為色譜純，氯仿、磷酸為分析純，水為超純水。
2、方法與結果
2.1色譜條件 色譜柱：YWGC1810µm（4.6mm×250mm）,流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸液（90：10），流速：1ml/min，檢測波長(cháng)：254nm，柱溫：30℃。
2.2標準曲線(xiàn)制備 精密稱(chēng)定大黃酚對照品4.18mg，用甲醇溶解并定容于50ml棕色量瓶中，精確吸取0.5、1.0、2.0、4.0、5.0ml于5個(gè)10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按色譜條件測定，進(jìn)樣量為20µl。線(xiàn)性范圍0.0836～0.8360µg,線(xiàn)性回歸方程為y＝2.69×106X-7.83×103，r＝0.9998。
2.3精密度試驗 取大黃酚對照品溶液，重復進(jìn)樣5次，每次10µl，對照品大黃酚峰面積積分值的RSD為1.4%。
2.4 穩定性試驗 取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′），在0、2、4、6hr分別進(jìn)樣10µl，記錄峰面積，結果4次進(jìn)樣峰面積RSD為1.9%。
2.5 重復性試驗 取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）5份。按樣品測定法測定，結果大黃酚的平均含量為1.34mg/g，RSD為1.8%。
2.6加樣回收試驗 取已知含量的決明子微粉樣品（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）約0.10g，精密稱(chēng)定，加入對照品溶液適量（0.116～0.155mg），揮干，按樣品測定法測定，平均回收率為93.5%，RSD為2.5%（n=4）。
3 供試品溶液制備與測定
3.1取決明子粉末（用小型粉碎機粉碎，過(guò)40目篩，不去皮）2g，精密稱(chēng)定，用索氏提取器甲醇提取至無(wú)色提取液定容于100ml量瓶；精密吸取該提取液10ml于蒸發(fā)皿中，50℃水浴蒸干，加2ml 2.5mol/L硫酸液溶解殘渣，洗入20ml具塞試管，沸水浴上水解2h，間斷振搖提取三次（8、8、4ml），合并氯仿液，用蒸餾水洗滌二次，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，搖勻，即得。
3.2取決明子約10g共5份，精密穩定，分別加蒸餾水100ml于具塞三角瓶中，稱(chēng)重，加熱回流15′、30′、45′、60′、90′，放冷，稱(chēng)重，加蒸餾水補足重量，搖勻，過(guò)濾，濾液待用；精密吸取以上各提取液10ml，于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置干燥器中至恒重，稱(chēng)重，用于浸出物量測定。
3.3 超微粉碎前決明子中總大黃酚含量及提取率的測定 吸取上述五組提取液2ml至大試管中，加5mol/L硫酸液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結果見(jiàn)表1：
表1不同提取時(shí)間對決明子總提取物含量和總大黃酚含量的影響
3.4超微粉碎后決明子中總大黃酚含量測定 取決明子各微粉組之微粉約1g共4份，置具塞三角瓶?jì)龋诱麴s水50ml，在80℃水浴上溫浸5、15、30、45min；取出，放冷，離心，吸取上清液2ml置于20ml具塞大試管，加5mol/L硫酸溶液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結果見(jiàn)表2、表3：
4討論
4.1粉碎條件與粒度的相關(guān)性 從“決明子粉碎條件及粒度”表中可以看出：①物料的干燥程度或含水率對粉碎細度有直接的影響，即含水率越低有助于粉碎成細顆粒；②當含水率相同時(shí)，粉碎時(shí)間越長(cháng)粉碎的粒度越細小，但粉碎到一定的時(shí)間點(diǎn)時(shí)，再延長(cháng)粉碎時(shí)間，則對粒度的影響變小，提示：對決明子的粉碎時(shí)，存在最佳粉碎條件的確定問(wèn)題。
4.2粉碎前后決明子總大黃酚提取率的比較
①從表1中可以看出，未粉碎決明子在提取條件相同的情況下，提取時(shí)間越長(cháng)，提取率越高，煮提3次，每次30min時(shí)，提取率可達到71.0%。
②從表3中可以看出，超微粉碎后，提取時(shí)間的延長(cháng)對提取率影響不大，提示：經(jīng)超微粉碎后，細胞壁被破碎，有助于總大黃酚的溶出，且溶出速度加快，提取5min時(shí)，即可達到或接近濃度平衡；實(shí)驗中還發(fā)現，隨著(zhù)提取時(shí)間的延長(cháng)，溶液的粘稠度也不斷增加。兩者比較：水煎煮決明子藥材（提取15min），大黃酚的提取率只有7.6%（以索氏提取器為計），而經(jīng)不同條件超微粉碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；如按提取總大黃酚含量不變比較，在80℃、5min水浸泡下，決明子微粉（干燥4h、粉碎32min）中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當。
③從表3中可以看出：用相同的提取時(shí)間下，粒度越細，溶出量越高，如粉碎25min、提取5min組，未干燥溶出量為0.42，干燥1h為1.60，而干燥4h為1.73。但從延長(cháng)粉碎時(shí)間、增加細度的樣品組看，細度越小，溶出量反而下降，尤其是粉碎40min組，溶出量下降明顯；而未干燥組，由于粉碎時(shí)間延長(cháng)，對粒度影響不大，因此對溶出量的減少不明顯，提示：粉碎時(shí)間的延長(cháng)，對總大黃酚類(lèi)成分有一定影響，說(shuō)明，從有效成分的溶出和保留來(lái)看，也存在最佳粉碎條件的確定問(wèn)題。可見(jiàn)，超微粉碎技術(shù)應用于中藥的粉碎時(shí)，存在一定的應用規律和應用條件等科學(xué)問(wèn)題，并不是一個(gè)簡(jiǎn)單的粉碎過(guò)程，應引起足夠的重視。
在本實(shí)驗中，將決明子粉碎去皮，其總大黃酚含量增加近74%，提示蒽醌類(lèi)物質(zhì)主要存在于果實(shí)中，皮中含量較少；游離的大黃酚僅占總大黃酚含量的1.47%。此外，有關(guān)超微粉碎后對決明子中蒽醌類(lèi)成分穩定性的研究及相關(guān)藥效學(xué)研究正在進(jìn)行中。
參考文獻：
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[2]張啟偉，陰健，張俊，等.生、炒決明子及其煎劑中部分活性成分的比較[J].中草藥，1996，27（2）：79.
[3]王慕鄒，梁彬，沙世炎，等.植物藥中一些主要成分測定方法的研究Ⅲ.蒽醌的測定方法[J].藥學(xué)學(xué)報1963，10（12）：720.
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